細(xì)胞株在生物制藥中使用非常廣泛，細(xì)胞株培養(yǎng)條件簡單，貼壁強度適中，比較容易轉(zhuǎn)染，很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。
細(xì)胞株的篩選我們要注意加藥時間以及維持濃度：
1.由于基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)之后要一段時間才能表達(dá)出蛋白質(zhì)。所以細(xì)胞株篩選時不能太早;但是也不能太晚，因為轉(zhuǎn)染了外源基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒，終導(dǎo)致篩選不出陽性克隆，一般要在轉(zhuǎn)染24小時之后才開始加篩選。隨著細(xì)胞的代謝，濃度和活性都會下降，所以每3-5天都要更換一次篩選液。
2.加抗生素的時機，主要是考慮插入到細(xì)胞基因組的抗性基因是否已經(jīng)得到表達(dá)。一般是轉(zhuǎn)染48小時后加入抗生素。挑出單克隆后就可以用維持濃度，一般是穩(wěn)定細(xì)胞株篩選濃度的1/2。
關(guān)于維持濃度，有人說細(xì)胞會出現(xiàn)對抗生素的抗性，應(yīng)不斷提高其濃度。而且如果要挑選幾個陽性克隆中較高表達(dá)的克隆的話，可以調(diào)整抗生素的濃度。當(dāng)然，抗性基因高表達(dá)，目的基因不一定就跟著高表達(dá)。
此外，也需穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建培養(yǎng)液：
加藥篩選穩(wěn)定細(xì)胞株約6天左右，細(xì)胞會大量死亡，孔中只剩下的細(xì)胞*。這時會出現(xiàn)：
1.死亡的細(xì)胞會裂解釋放出有害物質(zhì)，導(dǎo)致那些有表達(dá)陽性細(xì)胞死亡，即非選擇性死亡，因此要及時換液。
2.孔中細(xì)胞數(shù)目很少，細(xì)胞之間的信號會變得很弱，也會導(dǎo)致陽性細(xì)胞的狀態(tài)不佳甚至死亡。這個時候需要一種特殊的培養(yǎng)液，再轉(zhuǎn)染后篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株過程中就可以應(yīng)用這種培養(yǎng)基。
3.適當(dāng)增加血清濃度。
